正相柱清洗步骤

正相柱就是固定相极性比流动相极性大,对于正相柱,流动相极性越大,洗脱能力越强,出峰时间越快。正相柱一般用的流动相比较多的是正己烷

等非极性溶剂,水是强极性溶剂,正相色谱中用的量很少，水含量稍微一点的小变化，就会对出峰时间有很大的影响，所以正相色谱对水分含量

极敏感。正相填料，硅胶、氨基、CN 基等，本身并无特殊，也不是碰到水就会损坏的。

正相色谱柱清洗步骤：

1.每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。
2.先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。
3.再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。
4.100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床

有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。色谱症状和清洗再生过后的色谱性能恢复情况往往能提供色谱柱真正存在问题的线索。

问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

答：

1、样品量不足：解决办法为增加样品量 

2、样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 

3、样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器 

4、检测器衰减太多：调整衰减即可。 

5、检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数 

6、检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。 

7、检测池中有气泡：解决办法为排气。 

8、记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。 

9、流动相流量不合适：调整流速即可。 

10、检测器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。