色谱柱柱温的影响

大多数分离工作是在室温下进行的，如果实验室的温度保持不变的话没什么问题，但大多数工作环境的温度会有波动，这对方法的实验室间重现性非常不利。温度对等度分离的保留时间有影响，一般来说，每增加1℃，保留时间就减少1－3％。即使在温度控制、日夜恒温的环境下，由于昼夜温差的影响，室温也会发生较大的变化，特别是在进行大批量的样品分析时（如人体药代或生物等效性试验），能使保留时间发生较大的变异。与等度洗脱相比，梯度洗脱的保留时间对温度的变化较不敏感。 温度的变化会引起色谱柱对所要分离物质选择性的变化，这种变化取决于化合物的性质，所以可通过控制温度来实现化合物的分离。色谱柱温度平衡得不好，会使得峰展宽。柱温变化，保留时间和柱选择性发生变化，峰宽随之变化，柱温升高使得理论塔板数增大，峰变窄，灵敏度增高。如果色谱柱、溶剂瓶、泵和自动进样器都在室温下工作，则整个系统的温度是一致的。如果对色谱柱进行加热，而溶剂和系统的其它部分在室温下工作，会使得色谱柱入口的温度低于出口的温度，这种温度梯度对峰形不利。解决的办法可以在自动进样器与柱子之间加一个预热器（preheater），如有些商品化的柱温箱已经带预热器了。如此一来，有些峰展宽和峰拖尾的原因就比较好解释了，色谱带的前缘温度高于后缘，所以移动的速度也就较快，因而产生峰展宽和峰拖尾。现在使用预热器来改善峰形是较普遍的方法。 

1、色谱柱的贮存： 

a、柱的贮存条件影响柱寿命，贮存液中至少应含有20％有机溶剂，以防止微生物的滋生； 

b、绝对不能用缓冲液贮存色谱柱； 

c、用5倍柱体积的不含缓冲液的流动相冲洗色谱柱以去除缓冲液和盐。